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一代测序原理及应用
2016/7/19 9:55:30  阅读数:  网友评论:
 
一代测序仪利用Sanger测序——双脱氧末端终止法的原理,将被荧光标记的ddNTP掺入到dNTP中,由于ddNTP随机掺入,PCR产物从引物之后的第一个碱基开始,每一个位置都有可能是ddNTP。由于ddNTP缺乏链延伸所需要的3'-OH,链的延伸就选择性地在G、A、T或C处终止。这样的PCR产物与普通PCR不一样,不能形成一条电泳带,而是一组长度相差一个碱基的成百上千种片段。它们具有共同的起始点,终止在不同的的核苷酸上,每一个碱基都有相同的概率被终止。将得到的不同大小的片段进行毛细管电泳,通过对荧光信号的采集和拼接,最终获得目的片段的序列。
1.  应用范围:
① De Novo测序
② 重测序: 如突变检测、SNPs、插入、缺失、克隆产物验证、比较基因组
③ 分型: 如微生物和真菌鉴定、HLA分型、病毒分型
④ 其它: 如甲基化分析(重亚硫酸盐测序)和SAGE(基因表达串联分析)方法
2.  临床应用
肿瘤突变基因的检测和肿瘤个体化治疗

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