HIV感染是通过检测HIV的特异性抗体、抗原、核酸或病毒分离培养加以确立的，但是常规使用标准的诊断检测是血清学抗体检测，又称之为金标准方法。本文着重就HIV抗体检测予以叙述。HIV抗体检测包括筛查试验、复检试验和确认试验三个部分。筛查试验按检测标本种类分，可有血液检测、唾液检测和尿液检测之分；从测试原理来分，有酶联免疫法、凝集法、层析法；按速度分有常规法和快速法（如快速试剂以及明胶颗粒凝集试剂PA）。原则上筛查试验呈阳性反应的要做确认试验，如不告知受检者本人则可用替代策略。从我国多年来的实践，需要特别注意如下问题：

一、筛查和复检试验

1．坚持HIV-1/2混合试剂：

HIV有HIV-1和HIV-2两个型别，虽然在基因蛋白组分同为9个基因蛋白（除了一个基因不同，即分别为VPX和VPU），但是两型氨基酸序列的异源性仍有40-60%，尤其是两型的外膜部分。HIV-1和HIV-2的传染性、致病性和流行强度是不相一致的，目前HIV-1造成全球艾滋病的广泛流行，HIV-2以西非国家发生为主，但是近年来有向全球扩散的趋势。近年来我国HIV-2型引起的感染已屡见不鲜。我国早在1994年卫生部规定所用的HIV抗体筛查试剂必须是HIV-1/HIV-2混合型，而我们的邻邦印度未能实行这个政策，结果引起了HIV-2型的流行。美国统计了1987-1998年1月的资料，发现78例HIV-2感染，尽管多数与西非国家有内在联系，但是已成为不能忽视的一个问题，因此美国规定了来自西非国家的移民，与西非人共用针具或有性接触者，HIV-2感染者的性伴或公用针具者和HIV-2感染妇女的孩子，在西非地区旅游或商务时因故输血或使用未经消毒注射器具都要作HIV-2检测。事实上，在实施时不可能有这么清楚的界限。但是近年来发现在市场上国产试剂HIV-2包被抗原不稳定，遇及HIV-2标本不能呈阳性反应，出现假阴性结果。因此对用于血液筛查的HIV-1/2混合试剂必须做好质量控制。

2．复检时的血液标本：

初次筛查时发现阳性反应，应及时进行复检，复检时除了原标本外尚需采集新鲜标本一份，这样既可核对原有检测和复检结果一致性，又可了解有无血液标本受污。国际上均认为复检阳性才是做确认检测的指征。

然而，一些HIV筛查实验室发现初次筛查阳性反应，有的不做复检，或只做原有标本的复检，即将标本向确认实验室一送了事。在个别地区还发现标本交叉污染的事例多起，应引以为戒。

3．复检时的筛查试剂：

应该用2种不同原理的试剂，过去由于条件限制，当用ELISA筛查呈阳性反应，在重复测定标本时，如用快速试剂往往敏感性不高，故只好提出用两种不同厂家制造或用原试剂外再用一种国外进口ELISA试剂进行测定。这样做也是无奈之举。最近日本富士公司向我国注册并批批检HIV-1/HIV-2混合型的PA试剂，其测定程序与过去PA HIV-1相类似，其敏感性不但高，而且早为我国所熟悉，可以采用。

4．快速试剂和PA试剂的用途：

对血液HIV筛查和各医疗卫生机构常规筛查检测宜采用ELISA法，其理由是：1）目前采用第3代EIA试剂，其敏感度和特异度几为各类抗体检测试剂中最高，一般说其平均窗口期自暴露HIV 3周后开始检出；2）成本相对较低，操作技术已被广大实验室人员所掌握；3）有自动记录，便于质控、监视，也可作为重要专业档案，供医疗纠纷时的证据。当然也有不足之处，如需多份标本同时检测，冲洗技术要求较高，费时较长。但是，对用于血液筛查和医院常规检测不但适合而且是科学、经济又符合政策。目前，根据我国政府对艾滋病防治的“四免一关怀”政策，为了及时发现HIV感染者，提供临床关怀，对HIV检测结果呈阴性反应者要做好咨询，降低高危行为，要求医院开展VCT（自愿咨询检测），则要求使用敏感性特异性均佳的快速试剂（含PA试剂）供临床使用。对快速试剂，2001年国务院办公厅颁布的《五年行动计划》中明确规定可作为偏远地区血液筛查用。除此之外，其与PA试剂均可用于急诊需手术用血患者，也可用于具有高危行为的门诊病例，而估计其不一定复诊者。美国CDC也提出可以用于即将分娩的孕妇和HIV职业暴露者。但是，使用者必须经过上岗培训。在常规门诊中，如一天检测标本数量低于10份，也可考虑使用快速试剂（含PA试剂）。

5．单独HIV-1试剂不能完全测出HIV-2：

首先我们的政策规定，所有血液筛查试剂应该用HIV-1/HIV-2混合试剂。虽然用HIV-1筛查HIV-2，尽管两型之间有交叉，但仍有40％以上HIV-2呈现假阴性。最近，对同一份HIV-2临床标本，用不同市售试剂测定，在6种ELISA试剂中只有2家呈阳性反应，2家呈阴性反应，2家某些批号呈阴性反应，某些批号呈阳性反应。反而进口的Determine和PA均呈阳性反应。原因在哪里？可能是包被量不稳定造成的。

6．HIV-1尿液试剂的评估：

尿液检测试剂也是一种HIV抗体检测方法，主要测定IgA为主，不少发展中国家（包括我国在内）正在进行临床评估，但结果不相一致，最近巴西的结果，敏感度较好，但特异度稍低。认为采样方便，不损坏皮肤，对吸毒人群更易采集。尿液检测只能查HIV-1抗体，呈阳性反应需作血清学检测。

7．新的HIV抗体快速试剂：

最近美国FDA批准了一批敏感度特异度高的快速试剂如OraQuick，OraSure, Uni-Gold和加拿大的INSTI等快速试剂，其敏感度和特异度均大于99%，用1滴全血，不到30分钟能获得精确结果。

8．窗口期无法消除：

应用最好的HIV抗体筛查试剂，从感染HIV到检出HIV抗体仍然存在窗口期。有人在健康黑猩猩做过实验观察，用CHXQ34 HIV-1为38TCID50攻击，然后在攻击之初，以后每隔1周收集黑猩猩血浆和PBMC，作HIV RNA、HIV DNA、P24抗原和HIV抗体测定，结果在攻击4周内检测结果均为阴性，但第5周开始首次出现HIV RNA和HIV DNA阳性，以及分离培养HIV阳性，待第8周才开始检出HIV抗体，说明不同的指标其窗口期不一样。为了证明所攻击的黑猩猩，4周之内指标均阴性是否有感染性，以及第5周是否感染的分界线，又将上述攻击后的3、4周和5周标本，包括血浆与PBMC对另外健康黑猩猩进行攻击，结果3、4周标本不感染新的黑猩猩，唯有原5周标本可以使后者感染，也是以HIV RNA、HIV DNA出来最早，HIV抗体出现最晚。这一观察证明了，血清学窗口期难以消除，其他各种指标也有窗口期，但均较HIV窗口期短，为了缩短窗口期可否同时使用抗原和抗体测定，同时也证明在HIV感染4周内各种指标均阴性，是窗口期的非感染期。

9．第4代ELISA试剂：

自1985年第一代ELISA试剂盒问世后，对其包被抗原和检测方法不断进行改良，到第2代试剂已从全病毒抗原包被发展为重组或多肽抗原，到第3代时，不仅包被抗原高度纯化，采用重组和多肽相结合，测试方法采用了夹心法之外，特别对抗原组份进行研究，尤其包括了O群抗原，使漏检率明显下降，同时大大缩短了窗口期，一般在感染3周后陆续检出。但是血清抗体阳转前的窗口期是永远存在的。为了能避免窗口期期间的传染危险性，ELISA试剂又发展到同时测抗原抗体的第四代试剂盒。目前在国际上已有六、七种这类试剂，如荷兰、法国、瑞士、德国、卢森堡、美国有关厂家都生产了这类试剂盒，我国在未正式研制成之前，国外第四代试剂盒已向国家FDA注册，供应上市。首先如何选择PANEL，根据文献报导有几个方面组成，即有HIV-1M群多种亚型和O群的P24抗原，HIV-1M群各种抗体和O群抗体，HIV-2抗体阳性血浆标本，以及HIV抗体阳转系列血清，经过评估结果来看，第四代试剂可以减少窗口期平均为4 天，对抗原的敏感度要比单一测抗原的试剂稍低，检测抗原的量需在20-100pg/ml，尤其对HIV-1非B亚型、O型和HIV-2的敏感度差异较大，同时也会对测抗体敏感度有影响，此外，假阳性率比单品种试剂盒的阳性率有所提高（从0.2%增至0.3-0.8%）。

二、确认试验：

1．确认试验的应用：

目前HIV抗体检测目的，无非分三大类，即血液筛查、流行病学调查与疫情报告，以及临床病例诊断。全球和我国均明确规定，凡对临床病例做出诊断，则务必作确认试验。目前全球常用2种确认试验方法，即间接免疫荧光法（IFA）和免疫印迹法（WB）。我国艾滋病检测工作规范规定用免疫印迹法（WB）。HIV-1和HIV-2不同结构蛋白的位点不一，ENV蛋白的分子量，HIV-1为gp41、gp120和gp160，而HIV-2为gp36、gp105和gp140；GAG蛋白，则HIV-1为p17、p24和p55而HIV-2分别为p16、p26和p56；POL蛋白，HIV-1分别为p31、p51和p66（65）而HIV-2分别为p34、p53和p68。对HIV-1阳性结果至少有2个膜蛋白（gp41+gp160或gp120），或者有一个膜带和p24；HIV-2阳性至少有2个膜带。众所周知WB的技术是根据HIV不同抗原蛋白组分用SDS免疫电泳法按不同分子量印迹在纤维膜上，当与相应标本的抗体相结合显示条带，按不同条带加以判断HIV阳性与否。

2．WB在我国的应用史：

WB作为确认试验方法也有一个过程，最早只限于使用HIV-1型，到了95年以后开始供应单个测定的HIV-1型和2型。近年来，我国开始使用HIV-1和HIV-2混合型。用的比较多的是Genelabs公司的I/II混合型，在条带上有HIV-2型的gp36抗原包在纤维膜上。通过大量使用，发现试剂批间有差异，尤其在gp41和p24条带上有明显差异，还有过夜